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標(biāo)題《心臟干細(xì)胞分離培養(yǎng)及其增殖與遷移的機(jī)制》
摘要:背景:體外環(huán)境下進(jìn)行心臟干細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中,生長(zhǎng)微環(huán)境可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的的增殖等產(chǎn)生一定的影響。目的:在體外環(huán)境下培養(yǎng)大鼠心臟干細(xì)胞,探討心臟干細(xì)胞增殖、遷移的可能機(jī)制。方法:納入SD大鼠10只,獲得心肌組織塊進(jìn)行原代和傳代培養(yǎng)。收集第3代心臟干細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色,進(jìn)行干細(xì)胞鑒定,檢測(cè)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(c-kit)和CD45、CD90的表達(dá)。收集培養(yǎng)后的組織塊,隨機(jī)分為2份,一份用多聚甲醛進(jìn)行固定,常規(guī)石蠟包埋后切片,進(jìn)行蘇木精-伊紅染色、Masson染色以及細(xì)胞凋亡檢測(cè);另一份在培養(yǎng)基中添加Ed U標(biāo)記增殖細(xì)胞,采用免疫熒光染色檢測(cè)c-kit陽(yáng)性細(xì)胞以及基質(zhì)金屬蛋白酶2,9及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1等表達(dá)。結(jié)果與結(jié)論:(1)細(xì)胞鑒定結(jié)果:心肌組織培養(yǎng)7-10 d后有明亮的圓形細(xì)胞長(zhǎng)出,細(xì)胞貼壁后呈梭狀,生長(zhǎng)、增殖能力旺盛。免疫熒光染色可觀察到大量細(xì)胞呈c-kit、CD45陽(yáng)性表達(dá),CD90陰性表達(dá);(2)細(xì)胞凋亡情況:培養(yǎng)的組織塊切片后染色見(jiàn)大量新生細(xì)胞生長(zhǎng)的同時(shí)伴隨心肌細(xì)胞的凋亡;(3)免疫熒光染色結(jié)果:經(jīng)EdU標(biāo)記后陽(yáng)性細(xì)胞分布于心肌間隙,基質(zhì)金屬蛋白酶2,9及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1少量表達(dá),... 更多
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